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尼达尼布的治疗效果如何?
时间:2021-06-08
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来源:本站原创

  尼达尼布的治疗效果如何?尼达尼布和吡非尼酮在体内肺纤维化动物模型中均显示出抗纤维化能力。由于我们的最终目标是在人肺纤维化体外模型中测试化合物的作用,因此我们试图通过小鼠体外模型来建立该方法的可行性。小鼠接受气管内博莱霉素治疗,并在体内纤维化发育14天后生成3D-LTCs,这是一个已建立纤维化的时间点,推荐进行潜在抗纤维化药物的临床前试验。我们首先建立基线特征产生的新鲜健康和纤维化小鼠3d-ltcs,发现3d-ltcs源自纤维化小鼠肺纤维化结构体外,增加alpha-SMA染色,伴随着减少钙粘蛋白表达,因此证明3d-ltc代不会明显影响基线差异。为了进一步表征培养中3D-LTCs的纤维化表型,我们在48小时后分析了纤维化标志物。PBS对照相比,间充质标记基因Fibronectin1(Fn1)和Collagen(Col)1a1的表达均显着上调。与此同时,通过WesternBlotting分析,总胶原蛋白的分泌显着增加。此外,我们发现wnt1诱导信号蛋白(WISP)1的分泌在纤维化小鼠和人类纤维化远端肺上皮中增加,在48h时显着上调。

尼达尼布的治疗效果如何

  尼达尼布的治疗效果如何?鉴于在体外3D-LTCs中纤维化表型得以维持,我们接下来分析了吡非尼酮和尼达尼布的治疗效果。我们观察了这两种化合物的剂量依赖效应。尼达尼布显着下调了1个差值M处Fn1和Col1a1的mRNA水平(分别为0.94±0.25和1.51±0.99;而吡非尼酮在2.5mM时显着下调Col1a1(1.36±1.39和1.95±1.07)。此外,通过Westernblotting分析,纤维性3D-LTCs中胶原的分泌在尼达尼布治疗后呈下降趋势,而吡非尼酮治疗后胶原的分泌没有变化(尼达尼布和吡非尼酮分别为0.61±0.16和1.28±0.82)。除了对胶原的分泌没有显着影响外,两种药物对PBS处理小鼠的3D-LTCs纤维化基因表达的影响相似。总的来说,这些数据证实了先前报道的吡非尼酮和尼达尼布在体外组织培养模型的肺纤维化实验模型中的抗纤维化作用,并证明3D-LTCs可以用于进一步研究这两种药物对细胞表型和功能的影响。此后,我们使用的浓度分别为1甲氧苄M吡非尼酮和500甲氧苄M吡非尼酮,因为这些浓度在体外研究中被广泛使用和推荐,并在我们的体外模型中显示出抗纤维化活性。

  虽然这两种药物的抗纤维化作用主要研究成纤维细胞,但对尼达尼布和吡非尼酮对肺上皮的作用知之甚少。我们首先评估了功能ATII细胞标记物表面活性剂蛋白C(SP-C)的变化,发现尼达尼布增加了纤维化3D-LTCs中uc-C蛋白的表达并影响了SP-C的分泌:为了确定尼达尼布治疗是否也能够抑制上皮来源的促纤维化介质的表达,我们检测了WISP1的分泌,在纤维化和正常3D-LTCs中,尼达尼布均被减弱,并通过ELISA进行了评估。相比之下,吡非尼酮并没有持续诱导SP-C的分泌或普洛斯-c的表达,也没有影响纤维化3D-LTCs中WISP1的分泌。为了排除较高吡非尼酮浓度对上皮细胞的影响更为一致,我们测试了2.5mM浓度的吡非尼酮对Sftpc基因表达没有任何显着影响。

  接下来,我们的目标是在纤维性pmATII细胞中验证这些发现。与PBS对照组相比,在经博莱霉素灌注的小鼠培养的pmATII细胞中,Fn1的表达显着增加(PBS对Bleo:5.78±0.04vs6.69±0.37。然后,我们研究了表型和功能性ATII细胞标记物的基因表达变化,包括表面活性蛋白C(Sftpc)、Nkx2.1(甲状腺转录因子1(TTF-1))、ATI细胞标记物(T1a(Podoplanin)),以及ATI和ATII细胞假定的双效祖细胞群体标记物(同源域仅蛋白X(Hopx))。值得注意的是,纤维化pmATII细胞中Sftpc、Nkx2.1和Hopx的表达降低,而T1细胞(Podoplanin;ATI细胞的标记物)增加,可能表示试图通过ATII向ATI细胞转分化进行修复。qPCR检测显示,尼达尼布和吡非尼酮在健康和纤维化pmATII细胞中均显着下调Fn1。根据我们之前在3D-LTCs中观察到的结果,尼达尼布处理使Sftpc、Nkx2.1和Hopx的表达恢复到PBS对照组水平。吡非尼酮治疗增加了Hopx和T1的转染细胞,但不影响ATII细胞标记物Sftpc和Nkx2.1的表达。

  尼达尼布的治疗效果如何?大多数关于尼达尼布或吡非尼酮的机制研究都是在分离细胞或小鼠上进行的。我们下调查的影响因此尼达尼布(1μM)和Pirfenidone(500μM)在人类3d-ltcs和特别关注其对远端肺上皮细胞标记的影响。我们最近开发了一个模型,诱发早期纤维化改变人类3d-ltcs使用四个生长因子和信号分子在纤维化升高(FC;通过免疫荧光染色,纤维连接蛋白沉积证实了FC在我们队列中诱导早期纤维样改变。重要的是,用尼达尼布或吡非尼酮处理fc处理的3D-LTCs并没有改变代谢活性(WST-1活性测量),这表明总体细胞存活没有受到影响。与我们之前的研究结果一致,尼达尼布处理恢复了上皮细胞基因表达,恢复了zo-c蛋白表达和SP-C分泌。相比之下,Pirfenidone并不影响上皮细胞在这个模型。总的来说,尼达尼布调节ATII细胞标记表达式在小鼠和人类3d-ltcspmATII细胞,而Pirfenidone没有明显影响的表达分析ATII细胞标记在我们的研究中。

 

 

 

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