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依鲁替尼/亿珂调节LPS诱导的胞质水平
时间:2020-12-17
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来源:本站原创

  转录因子信号转导子和转录激活子3是在LPS治疗后调节促炎细胞因子水平的关键信号分子。我们检查了依鲁替尼是否调节LPS诱导的p-STAT3(Ser727)水平。 BV2小胶质细胞用依鲁替尼(亿珂)或媒介物(1%DMSO)处理5 h,然后用LPS(1μg/ ml)或PBS处理45分钟,并用抗p-STAT3进行蛋白质印迹和抗STAT3抗体。

依鲁替尼

  我们发现依鲁替尼降低了BV2小胶质细胞中LPS诱导的p-STAT3水平。然后,我们测试了依鲁替尼是否单独改变BV2小胶质细胞中的p-STAT3水平。将BV2小胶质细胞用依鲁替尼或媒介物处理6小时,并用抗p-STAT3和抗STAT3抗体进行蛋白质印迹。有趣的是,与不使用LPS的载体治疗相比,依鲁替尼本身下调了p-STAT3(Ser727)水平。

  接下来,我们检查了依鲁替尼是否调节LPS诱导的胞质和核p-STAT3水平。 BV2小胶质细胞用依鲁替尼(1μM)或溶媒预处理30分钟,然后用LPS或PBS处理5.5 h,然后进行亚细胞分级分离。与媒介物处理相比,LPS处理显着增加了细胞核(图6d,e)和胞质溶胶中的p-STAT3)水平。此外,依鲁替尼显着降低了LPS刺激的核p-STAT3(Ser727)水平的升高,并有降低胞质p-STAT3水平的趋势。为了验证这些发现,我们用抗p-STAT3和抗CD11b抗体进行了免疫细胞化学,发现依鲁替尼显着下调了BV2小胶质细胞中LPS诱导的核p-STAT3(Ser727)的水平 。这些数据表明,依鲁替尼可调节细胞质和细胞核中的p-STAT3水平,从而修饰LPS诱导的促炎反应。

  为了研究依鲁替尼是否通过调节AKT信号来改变LPS诱导的核内p-STAT3水平,将BV2小胶质细胞用MK2206(AKT抑制剂,10μM)或溶媒(1%DMSO)预处理30分钟,然后通过使用依鲁替尼(1μM)或溶媒处理30分钟,然后用LPS(1μg/ ml)或PBS处理5小时。用抗CD11b和抗p-STAT3抗体进行免疫细胞化学。与上述发现一致,与LPS治疗相比,依鲁替尼显着降低LPS诱导的核p-STAT3(Ser727)水平。与LPS治疗相比,用MK2206和LPS治疗可显着降低LPS诱导的核p-STAT3(Ser727)水平。

  此外,与MK2206和LPS治疗相比,MK2206,依鲁替尼和LPS治疗显着抑制LPS诱导的核p-STAT3水平。这些数据表明,依鲁替尼可能以独立于AKT的方式影响LPS诱导的核p-STAT3水平。小胶质细胞运动与促炎反应有关。因此,我们检查了依鲁替尼是否调节LPS诱导的BV2小胶质细胞迁移。我们通过用依鲁替尼(500 nM)或溶媒对细胞预处理1 h,然后对LPS或PBS预处理23 h,进行了伤口愈合试验。与媒介物处理相比,LPS处理显着增加了BV2小胶质细胞迁移。

  此外,与LPS治疗相比,依鲁替尼显着降低LPS刺激的BV2小胶质细胞迁移。然后,我们调查了依鲁替尼本身是否调节BV2小胶质细胞迁移。使用细的移液器吸头刮擦BV2小胶质细胞,并立即成像(0小时)。然后将细胞用依鲁替尼或溶媒处理24小时,然后对伤口间隙进行成像。我们发现,与不使用LPS的媒介物治疗相比,单独使用依鲁替尼不能降低BV2小胶质细胞迁移。这些数据表明,依鲁替尼可调节LPS诱导的BV2小胶质细胞迁移。然后我们进一步研究了依鲁替尼是否通过AKT信号转导LPS诱导的BV2小胶质细胞迁移。

  使用细的移液器吸头刮擦BV2小胶质细胞并立即成像,然后用MK2206或媒介物,依鲁替尼(500 nM)或媒介物(30%)处理30分钟,最后加入LPS(100 ng / ml)或PBS 23小时。与我们上述发现一致,与LPS治疗相比,依鲁替尼显着抑制LPS诱导的BV2小胶质细胞迁移。更重要的是,与用MK2206和LPS或依鲁替尼治疗相比,用MK2206,依鲁替尼和LPS治疗并没有改变LPS诱导的BV2小胶质细胞迁移。现在依鲁替尼的效果也是非常不错,如果您有需要购买,更多详情可咨询下方微信。