奥拉帕利/奥拉帕尼要吃几个疗程

  背景:  

  卵巢癌(OC)是最致命的妇科恶性肿瘤,是女性癌症相关死亡的第二大原因。使用PARP抑制剂(PARPi),如奥拉帕尼治疗OC患者,最近已被引入,但可能出现耐药,其潜在机制仍不清楚。本研究的目的是识别肿瘤细胞中可能导致奥拉帕尼耐药的靶基因。我们重点研究了神经pilin1(NRP1),这是一种跨膜受体,在OC中表达并与较差的生存率相关,它也被认为是OC多药耐药的关键分子。  

  方法:  

  以3个OC细胞系(UWB、UWB-brca和SKOV3)为模型系统,通过MTT、集落形成、流式细胞术、免疫荧光和Westernblot分析,评价奥拉帕尼对OC细胞生长、细胞周期、DNA损伤和凋亡/自噬诱导的生物学和分子效应。我们通过Westernblot和qRT-PCR方法检测NRP1在OC标本和细胞系中的表达,并利用RNA干扰选择性抑制NRP1。为了确定miR-200c作为NRP1的调控因子,我们在OC患者的活检中使用了miRNA靶标预测算法和Pearsons的相关性分析。然后,我们使用稳定转染方法在奥拉帕尼耐药细胞中过表达miR-200c。  

  结果:  

  我们观察到NRP1在耐药细胞(SKOV3)中高表达,并在部分敏感细胞(UWB-BRCA)中上调,导致药物反应不良。我们的结果表明选择性抑制NRP1能够克服SKOV3细胞对奥拉帕尼的抗性。此外,我们证明了miR-200c可以靶向OC细胞中的NRP1,导致其下调,并且miR-200c过表达是恢复OC耐药细胞奥拉帕尼敏感性的有效途径。 

  结论:  

  这些数据表明,miR-200c显著增强了奥拉帕尼在OC耐药细胞中的抗癌作用。因此,奥拉帕尼与基于mirna的治疗组合可能是一种有前途的治疗耐药OC的方法,我们的数据可能有助于设计新的精确药物试验,以优化PARPi的临床使用。  

  OC是女性癌症相关死亡的第五大原因。它的高死亡率发病率主要是由于缺乏oco特有症状和缺乏有效的筛查策略。目前,OC治疗的医疗选择可能包括手术、化疗和放疗的结合。然而,OC患者的一般预后仍然较差,的5年生存率约为30%。据了解,大约10-15%的卵巢癌患者在编码BRCA1和BRCA2蛋白的基因中存在种系突变,它们参与了介导双链DNA断裂修复的同源重组(HR)过程。BRCA1/2突变的OC患者通过HR修复双链DNA损伤的能力受损。在这种情况下,PARP抑制剂,影响第二种DNA修复途径,碱基切除修复(BER),能够通过一种称为合成致死率的机制导致死亡。因此,PARPi最近被批准用于治疗BRCA1/2突变的肿瘤。  

奥拉帕尼

  然而,临床反应率奥拉帕尼(azd-2281),一个小分子抑制剂PARP1,低于50%OC患者证实BRCA1/2失活,而一个子集的病人没有生殖系BRCA突变可能存在所谓的“BRCAness”表型,损伤的人力资源途径由于其他原因(体细胞突变,以及其他HR通路的表观遗传调控或突变),这可能与使用这些药物治疗后提高应答率和生存率有关。目前,肿瘤学家面临的主要问题之一是如何确定最适合的一组患者能够受益于PARPi的治疗。此外,许多OC患者出现局部复发和远处转移,常伴有一线治疗和PARPi抵抗。所以,更好的理解PARP抑制的功能和耐药机制的理解都需要预测PARPi临床疗效通过识别响应患者除了BRCA突变,并改善OC患者的临床管理通过引入新颖有效的临床协议基于组合疗法。  

  首先,我们探讨了延长奥拉帕尼治疗对三种OC细胞系的影响,并证实了不同BRCA状态的药物反应特征。正如预期的那样,我们观察到治疗奥拉帕尼能够诱导的DNA损伤和G2/M期细胞循环逮捕所有的OC细胞系,但这样的改变导致激活只在敏感的超宽频细胞凋亡通路,也许由于DNA链断裂的持久性,这是恢复在144hUWB-BRCA和SKOV3细胞,随后没有凋亡诱导后奥拉帕尼治疗。与我们的数据一致的是,BRCA1单等位基因突变的淋巴母细胞在奥拉帕尼治疗时表现出持续的DNA损伤,这使它们对伽马射线过敏。 

  然而,我们的结果指出奥拉帕尼在UWB-BRCA细胞中部分降低了克隆能力。有趣的是,在这些细胞中,我们还观察到奥拉帕尼处理后自噬的激活。众所周知,自噬可以调节响应DNA损伤,而在癌症可能作为一种自适应的背景下cytoprotective响应,代表一个选择性的优势增强肿瘤细胞的耐药性和攻击性,或者作为一个替代消除转化细胞凋亡。在卵巢癌细胞中,自噬的这种替代作用被认为取决于BRCA的状态。我们的数据表明,在部分耐药的UWB-BRCA细胞中,延长奥拉帕尼治疗决定了自噬激活,但不能刺激细胞凋亡。值得注意的是,我们发现自噬抑制剂氯喹(chloroquine,CQ)并未诱导奥拉帕尼处理的UWB-brca细胞凋亡激活,反而降低了奥拉帕尼诱导UWB细胞凋亡激活的能力,这表明自噬在OC细胞奥拉帕尼柠檬毒性中发挥了重要作用。  

  此前已有研究证实NRP1的调控在介导肿瘤生长和血管生成中发挥重要作用。此外,已有研究报道了NRP1在OC中相对于正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤过表达,以及NRP1的高表达与较短的生存时间存在相关性。然而,关于NRP1表达与OC的组织类型或临床病理分期的相关性的不同研究并没有完全一致。有趣的是,在我们的研究中,我们观察到在40例OC患者中NRP1相对于正常卵巢组织表达较低,在28例OC样本中,我们可以发现浆液性组织型的高度流行。我们对OC组织的研究结果与我们观察到的NRP1基础水平在浆液性OC细胞系(UWB和UWB-brca细胞)中相对于在腹膜腺癌细胞(SKOV3细胞)中较低一致。  

  此外,对化疗前和化疗后的OC样本NRP1表达的比较分析指出NRP1参与了OC对治疗的适应性反应,这一发现进一步强化了这一点,即延长奥拉帕尼治疗后敏感细胞NRP1上调。事实上,我们证明奥拉帕尼只能显著上调UWB-BRCA细胞的NRP1mRNA和蛋白,这表明在这些细胞中NRP1的表达足以调节药物敏感性,这限制了奥拉帕尼对细胞活力和凋亡诱导的影响。我们的数据表明NRP1水平可能调节OC细胞系对PARPi的耐药,这与生物信息学网络分析表明NRP1在耐药中可能发挥的作用是一致的。因此,阻断OC细胞中NRP1的表达可能为增加耐药细胞对奥拉帕尼的敏感性提供了途径。结果显示,在奥拉帕尼处理后,NRP1下调SKOV3耐药细胞的活性,降低集落形成潜力,诱导细胞凋亡,说明NRP1的缺失可以恢复对PARPi的敏感性。  

  越来越多的证据表明,属于miR-200家族的mirna(包括miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-429和miR-141)的异常表达与OC的发展以及化疗耐药性有关。其中一些mirna已被证明与NRP13'-UTR相互作用,并负调控NRP1信号。我们将注意力集中在miR-200c上,因为它在OC中高表达,可能有助于上皮-间质转化、侵袭性、肿瘤生长和转移。另一方面,miR-200c的缺失与在不同类型的癌症(包括OC)中获得对各种化疗药物的耐药性有关。到目前为止,miR-200c在耐药中的作用和分子基础仍不明确。在我们的患者队列中获得的关于miR-200c表达的数据与之前评估OC中miR-200c表达上调的文献一致,并证实了miR-200c与NRP1表达呈负相关关系。 

  我们的研究显示,在OC细胞中过表达miR-200c通过调节NRP1的表达逆转了对奥拉帕尼的抗性。与我们的研究结果一致,其他研究报告的相关性低表达mir-200c和紫杉醇的耐药性OC,并恢复紫杉醇敏感性在mir-200-c超表达chemotherapy-resistant癌症细胞系和在异种移植肿瘤模型,这证实了mir-200-c作为一种重要的控制点在OC化学抗性的发展。  

  我们的结果表明,NRP1下调或miR-200c上调的肿瘤可能更容易受到PARP抑制或基于合成致死率的其他策略的影响。未来的研究将确定NRP1/miR-200c的表达水平是否可以作为OC患者治疗策略和临床结果的决定因素。  

  事实上,这种新的治疗方法在OC细胞模型中的疗效,基于特定miRNA分子的过表达下调NRP1,为临床前小鼠模型的体外实验翻译提供了理论基础。该方法设计用于与PARPi联合使用,以最小毒性提高治疗效果,有潜力开发出更有效、毒性更小的治疗方案,用于OC患者的临床治疗。接下来,我们将建立体内实验来测试miR-200c的上调在克服异种移植小鼠模型上parpi相关耐药性方面的作用。未来的研究还将包括肿瘤干细胞(CSCs)在奥拉帕尼耐药机制中的作用,通过分析miR-200c在单药治疗和联合奥拉帕尼在干细胞相关通路中的作用。我们认为,特异性致敏CSCs的佐剂分子策略的发展将进一步促进OC的根除。奥拉帕尼要吃几个疗程?奥拉帕尼多少钱一盒?详情请扫码咨询:

 

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