靶向药卡马替尼在哪里购买

  卡马替尼是现在全世界首款口服式的MET患者用药,对于治疗转移性非小细胞肺癌(NSCLC)的成年患者有着不错的控制效果。今年已经通过了美国药监局的批准已经成功上市,暂定的售价都在十几万人民币一盒,非常的昂贵,靶向药卡马替尼在哪里购买?尽管如此,现在也是有价无市,国内有没有售卖,所以更多的人希望能买到药物,也希望买到便宜的版本,现在各大国家药厂其实都在仿制卡马替尼,现在老挝已经有消息快要投入生产了,如果您有需要可以添加下方微信,我们会在第一时间向您提供售卖。其他仿制药,我们也均有售卖。

卡马替尼

  EBC-1细胞系是携带MET扩增的NSCLC细胞系,购自JCRB细胞库(日本大阪)。通过逐步暴露于终浓度分别为1.5、2.2和2.4μmol/ L的卡马替尼来建立耐卡马替尼的EBC-1细胞系(EBC-CR1,-CR2和-CR3),并且从没有这种细胞的情况下不从其中选择一个克隆。将EBC-CR1,-CR2和-CR3细胞维持在1μmol/ L卡马替尼中2个月以上,并通过多种耐药机制进行选择;这些被称为卡帕替尼耐药细胞系。将所有细胞系在37°C培养箱中,在含10%FBS,2 mmol / L L-谷氨酰胺(Gibco)和1%青霉素/链霉素(Gibco)的RPMI1640培养基中孵育。

  卡帕替尼(MET抑制剂),克唑替尼(间变性淋巴瘤激酶/ MET抑制剂),阿法替尼(不可逆EGFR抑制剂),BYL719(PI3Kα抑制剂),PD1730-74(成纤维细胞生长因子受体[FGFR]抑制剂)和BGJ398(FGFR抑制剂)分别为从塞勒克化学公司(马萨诸塞州波士顿)购买。卡马替尼的制备浓度为5 mmol / L,其他药物制备为10 mmol / L的100%二甲基亚砜储备溶液。重组肝素结合型EGF样生长因子(HBEGF)购自Prospec(新泽西州东布伦瑞克市)。使用PowerPlex试剂盒通过短串联重复STR分析对本研究中使用的所有细胞系进行身份验证。为确定细胞系对这些抑制剂的体外敏感性,将细胞以5,000的密度接种到96孔微孔板中细胞/孔并在暴露于药物之前在培养基中孵育24小时。将细胞与抑制剂的连续稀释液以200μL/孔的终体积孵育72小时。温育72小时后,将Ez-cytox(Dogen,韩国首尔)添加到每个孔中,并将板在37℃温育器中温育3小时。

  使用Eon Microplate分光光度计在450nm的测试波长下测量光密度。 IC50值通过Sigma Plot 12计算。将细胞以5×105 /孔的密度接种在6孔板中,用于细胞周期和凋亡分析。 24小时后,将细胞用抑制剂处理72小时。收集贴壁细胞和浮细胞,并用碘化丙锭(1.0 mg / mL)和RNase A(10mg/mL)染色。 EBC-1通过BD 和ModFit LT verity软件通过流式细胞仪分析对细胞周期分布和sub-G1群体进行定量。

  将在6孔板中生长至足够密度的亲本和EBC-CR1,-CR2和-CR3细胞系分别单独用卡马替尼处理2小时,用卡马替尼和阿法替尼组合处理24小时,或用BYL719处理24小时。兔单克隆抗体,用于检测磷酸-MET(Tyr-1234 / 1235),磷酸-EGFR(Tyr1068),磷酸-STAT3(Tyr705),磷酸-AKT(Ser473),总MET,总EGFR,总AKT,总p44 / 42 MAPK,3-磷酸甘油醛脱氢酶和用于检测总STAT3的小鼠单克隆抗体购自。

  将蛋白G / A琼脂糖树脂与兔单克隆抗MET抗体,抗EGFR抗体或兔IgG对照孵育2小时,作为阴性对照,将1 mg蛋白质的细胞裂解液与抗体偶联树脂在4°C混合过夜。使用Pierce Co-IP试剂盒(Thermo Fisher Scientific)进行共免疫沉淀。洗涤,洗脱并通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分离免疫沉淀。如上所述进行蛋白质印迹。通过定量聚合酶链反应(PCR)确定基因拷贝数。使用Exgene Cell SV Kit从细胞系中提取基因组DNA。使用定量PCR确定基因拷贝数如下:使用GeneAmp PCR系统,用特异性引物和扩增gDNA。

 

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